{
    "title": "Dna İzolasyonu",
    "image": "https://www.dna.gen.tr/images/Dna-Izolasyonu-31.jpg",
    "date": "21.01.2024 00:48:22",
    "author": "Selen Karadeniz",
    "article": [
        {
            "article": "<div><b>Dna izolasyonu,</b> özel tekniklerle organik olarak bozulmayan hücrelerde DNA molekülünün açığa çıkarılmasıdır. Hücre içinde DNA mitokondride, kloroplast ve çekirdekte olur. DNA suda çözünse de alkolde çözünmez. Aynı zamanda negatif yüklüdür. DNA izolasyonu farklı alanlarda kullanılmaktadır. Bunlar arasında parmak izi, adli tıp, moleküler genetik çalışmaları, hastalıkların tanısı, taksonomi, gen klonlaması en yaygın kullanıldığı alanlardır.</div><div><br></div><div><b>Dna izolasyonu aşamaları nelerdir?</b></div><div><br></div><div><b>Hücre duvarının parçalanması:</b> Hücre çekirdeğindeki DNA'ya ulaşabilmek için hücre duvarı parçalanmalıdır. Bu fiziksel yollarla ya da kimyasal yöntemlerle yapılabilir. Yani hücreler fiziksel olarak ısıtılabilir ya da kimyasal karışımlar kullanılarak hücre duvarı parçalanabilir. Kimyasal karışımdaki tuz hücre duvarından geçip DNA'daki proteinleri ayırır. Deterjanda hücre duvarı geçirgenliğinin artmasını sağlar ve hücredeki içerikler serbest kalır. DNA'nın stabil kalmasını sağlamak içinde, EDTA magnezyumu bağlar, DNaz aktivitesini de inhibe eder. Protein parçalayan enzimlerde hücre içindeki proteinleri parçalar ve daha sonraki aşamalar için homojen karışımın oluşmasına zemin hazırlar. Hücredeki tek iplikçik halindeki stabil RNA'ların da ortamdan uzaklaştırılması için RNaz enzimi kullanılmaktadır. Parçalama sırasında kullanılan kimyasallar ve bunun süresi, materyale göre farklılık gösterebilir.</div><div><br></div><div><b>Dna protein kompleksinin çözünmesi ve moleküllerden ayrılması:</b> bu daha çok denatürasyona dayalı yapılan bir işlemdir. Son zamanlarda DNA yı tutan spin kolonları da bu işlemde kullanılmaya başlanmıştır. Denatürasyonda genellikle fenol ekstraksiyonu uygulaması kullanılır. Dn fragmanları ve fenol proteinler ayrılarak, birbirinden uzaklaşır. Fiziksel çözülmede spin kolonlar kullanıldığında özel solüsyonlar yardımıyla tüplere özel yerleştirilen matriks tabakasına DNA'nın tutunmasına çalışılır. Bu aşamada DNA dışındaki moleküllerde matrikse tutunamadığından uzaklaştırılmış olur. Solüsyonlar sayesinde spin kolonlar ve DNA dışındaki maddelerin uzaklaşması amacıyla bunlar yıkamaya tabi tutulur. Daha sonra ise elimine yapıcı solüsyonlar kullanılarak DNA ve matriks elüsyon aşamasın tabi tutulur ve DNA son halini alır.</div><div><br></div><div>Bu aşama <b>Dna izolasyonu</b> için en önemli bölümdür. Fiziksel çözülme ve kimyasalla yapılan müdahaleden oluşur. Fiziksel çözülmede dondurma ve çözme eylemleri, kimyasal müdahalede ise çeşitli maddeler kullanılır. Bunların arasındaki tuz hücre duvarından geçer ve DNA'nın proteinlere ayrılmasını sağlar. Deterjan hücrenin duvarının geçirgenliğini arttırarak, içeriğinin serbest olmasını, toluen, etil asetat, Sds membran yapının bozulmasını sağlar. Nükleit asitlerin çöktürülme işlemi için etanol ve izopropanol kullanılır. Proteinler sodyum sülft ve amonyum sülfat kullanılarak çöktürülür, homojen karışım elde etmek içinde proteinaz kullanılır. Rnaz işlemi ise Rna'ların ortamdan uzaklaştırılmasını sağlar.</div>"
        }
    ]
}